免裂解核酸提取试剂(磁珠法)

简要描述:
友康免裂解核酸提取试剂(磁珠法)由 磁珠悬浮混合液、纯化液、洗脱液 三种组分构成。一次纯化,操作更简便的同时,保证更高的核酸得率。

产品描述

免裂解核酸提取试剂(磁珠法)

【免裂解核酸提取试剂(磁珠法)用途】

用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。

主要用于拭子样本及唾液样本中病毒核酸的提取、富集、纯化等,处理后得到的核酸可用于常规的分子检测。

专门配套本公司灭活型病毒采样管产品。

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【免裂解核酸提取试剂(磁珠法)包装规格与组成成分】

试剂名称

50人份/盒

(MK0102-50)

100人份/盒

(MK0102-100)

500人份/盒

(MK0102-500)

规格数量规格数量规格数量
磁珠悬浮混合液1mL/管
12mL/管110mL/管1
纯化液(W液)8mL/管18mL/管280mL/管1
洗脱液10mL/管120mL/管1100mL/管1


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磁珠悬浮混合液纯化液(W液)洗脱液

【储存条件及有效期】

运输条件:常温运输。储存条件:磁珠悬浮混合液应置于2℃~8℃保存,其余组分于5℃~30℃保存。有效期12个月。

【样本要求】

采用本公司灭活采样管产品采集后的拭子样本及唾液样本,于室温条件下保存不超过48小时,置于-80℃可长期保存。

【免裂解核酸提取试剂(磁珠法)使用方法】

【检验方法】

1、自备试剂

对应各包装规格所需自备的异丙醇与无水乙醇用量参见下表:

规格50人份/盒100人份/盒500人份/盒
异丙醇15mL30mL150mL
无水乙醇32mL64mL320mL

注意:使用前请务必先在纯化液(W液)中加入无水乙醇,并做好添加标记,加入体积请参照上表。

2、样本前处理(以单人份为例)

1)唾液样本处理:

a. 采用灭活采样液采集完唾液样本运输至实验室之后,取出300μL样本加至一个无RNA酶的1.5mL离心管中,再向其中加入300μL的异丙醇;

b. 向上述离心管中加入20μL磁珠悬浮混合液,并涡旋振荡30秒进行充分混合。

c.室温孵育5分钟,期间上下颠倒混匀3-5次。

2)拭子样本处理:

a.将采集的拭子样液连同拭子一起涡旋振荡1分钟,使拭子上粘附的样本被充分洗脱下来。

b. 取出300μL洗脱后的样液加至一个无RNA酶的1.5mL离心管中,再加入300μL的异丙醇。

c.向上述离心管中加入20μL磁珠悬浮混合液,涡旋振荡30秒以充分混匀。

d.室温孵育5分钟,期间上下颠倒混匀3-5次。

3、将上述离心管置于磁力架上进行磁分离:离心管置于磁力架后,静置2分钟,期间每30秒轻轻地颠倒磁力架一次,使管盖上的磁珠也聚集到管壁。吸去磁珠以外的液体,避免吸到磁珠。

4、从磁力架上取下离心管,加入800μL 纯化液(W液)(使用前检查是否已加入无水乙醇),涡旋混匀20秒后进行磁分离,吸去磁珠以外的液体,避免吸到磁珠。用量程为10μL或者20μL的移液器吸去残留在管壁上较大的液滴。

5、将管盖打开,在超净工作台中晾干磁珠,晾3分钟为宜,如管底仍有肉眼可见的液体残留,用量程为10μL或者20μL的移液器将其吸去。

6、取下离心管,加入100μL洗脱液,吹吸混匀使磁珠充分悬浮后于室温孵育5分钟,期间轻轻涡旋2-3次以悬浮磁珠。

7、将离心管置于磁力架上进行磁珠分离,吸取磁珠以外的液体于无RNA酶的1.5mL离心管中,避免吸到磁珠,得到的核酸溶液用于后续检测或置于-70℃长期保存。

【产品性能指标】

1、外观

1.1 包装标签

包装完整无破损,标签清晰,液体无泄漏。

1.2颜色和澄清度

磁珠悬浮混合液,浑浊状态时为黑褐色混合液体,分层状态时,上层为无色液体,下层为黑褐色固体沉淀;洗脱液、纯化液(W液)均为澄清无色液体。

2、提取灵敏度

灵敏度为500 copies/mL。采用本品提取浓度为500 copies/mL的病毒样本核酸,荧光定量PCR结果呈现阳性。

3、核酸CV值

重复提取核酸浓度的变异系数(CV)应不大于5%。

【检验方法的局限性】    

提取液体样本的体积应控制在300μL±10μL。


相同病毒浓度下,友康产品可以得到更高的核酸浓度

实验设计

分别用友康生物免裂解病毒核酸提取试剂和三家国内知名品牌(A品牌、B品牌以及C品牌)常规病毒核酸提取试剂同时提取同一支同浓度 猪流行性腹泻病毒(PEDV)*的 RNA,然后采用荧光定量PCR进行检测。

低浓度组:1×105 copies/mL

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品牌Ct品牌Ct品牌Ct
友康22.27
友康22.27友康22.27
A品牌23.64B品牌22.93C品牌22.57

实验结果

在相同的病毒浓度下(病毒浓度为1×105copies/mL),友康免裂解病毒核酸提取试剂与A、B、C三个品牌常规病毒核酸提取试剂相比,Ct值较低。

结论:友康免裂解病毒核酸提取试剂 提取性能优于其他品牌产品。


高浓度组:5×108 copies/mL

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品牌Ct品牌Ct品牌Ct
友康13.44友康12.97友康13.24
A品牌18.84B品牌18.94C品牌18.26

实验结果

在相同的病毒浓度下(病毒浓度为5×108copies/mL),友康免裂解病毒核酸提取试剂与A、B、C三个品牌常规病毒核酸提取试剂相比,Ct值平均低5.4左右。

结论:友康免裂解病毒核酸提取试剂 提取性能显著优于其他品牌产品。


* PEDV,猪流行性腹泻病毒,为冠状病毒科冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒,病毒基因组为单股正链RNA病毒,有囊膜。病毒的基因组大小与结构组成均与COVID-19新型冠状病毒相近,适合用作实验材料。


客户问答

友康的免裂解核酸提取试剂(磁珠法)有什么优势?

序号差异之处传统五步法核酸提取试剂友康三步法核酸提取试剂
1采样管非灭活型采样管、灭活型采样管均可需搭配友康灭活型病毒采样管(MT0501)
2产品组成磁珠、蛋白酶K、裂解液、漂洗液1、漂洗液2、洗脱液磁珠、漂洗液、洗脱液
3操作步骤裂解+吸附+一次纯化+二次纯化+洗脱吸附+纯化+洗脱
4操作时间整个核酸提取需要30-60min整个核酸提取仅需15-20min
5是否加热裂解、洗脱环节,需60-70℃加热全程室温下操作即可,无需加热
6便利性步骤多、试剂多,操作不便利步骤少、试剂少,操作更便利
7提取得率相同病毒浓度下,友康免裂解核酸试剂提取核酸得率优于国内知名品牌




使用说明

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背景知识

核酸检测需要经过样本采集、核酸提取、核酸检测三个步骤。这三个步骤中,核酸提取(鼻咽拭子或下呼吸道样本)需要耗时30分钟至120分钟。

友康生物于2019年启动的“纯化核酸不能丢,但得协同”。具体来讲,就是将原来完全独立,互相没有关系的采样产品与核酸提取产品结合起来,将这两个产品的原有功能进行整合后再分配,发挥协同作用,一方面,通过调整病毒保存液配方,把原来需要在核酸提取环节完成的“蛋白裂解“工作,前置到采样管中利用送样前的空闲时间自动完成;另一方面,通过调整核酸提取试剂配方,减少操作步骤,进而减少核酸提取时间。

该技术路线在2021年获得了突破,该“三步法”核酸提取试剂,配合友康生物的灭活型病毒采样管(MT0703),大幅降低了核酸提取的时间,可在20分钟内完成核酸提取过程,相较目前五步法的60分钟,缩短了2/3时间。并且“三步法”的核酸提取效果显著优于“五步法”。








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